Accepted_test

Высокочувствительный микроанализ на основе искусственной люциферазы NLuc для диагностики социально значимых заболеваний

by Ludmila Frank | Institute of Biophysics, FRC “Krasnoyarsk Science Center SB RAS”, Krasnoyarsk, Russia

Abstract ID: 729

Event: BGRS-abstracts

Sections: [Sym 9] Section “Molecular Pathology, Diagnostics, and Therapeutics”

Люцифераза NanoLuc – искусственный фермент, полученный в результате мутагенеза каталитической субъединицы целентеразин-зависимой люциферазы глубоководной креветки Oplophorus gracilirostris. Малый молекулярный вес (19 кДа), уникально яркая биолюминесценция, длительная кинетика сигнала ((t_1/2=2,5 ч) и высокая термостабильность определили перспективность использования этого белка в качестве репортера в различных аналитических системах. Биоспецифические соединения NanoLuc получают с помощью генетического фьюзинга, поскольку, как и другие люциферазы, фермент теряет активность при химическом коньюгировании, что существенно ограничивает разнообразие биолюминесцентных репортеров на основе NanoLuc. Разработан дизайн и сконструирована плазмида, содержащая ген кодирующий вариант люциферазы NаnoLuc(C164S)-LCTPSR (NLuc) c уникальным остатком цистеина на С-конце. Соответствующий белок получен бактериальным синтезом, очищен хроматографически и изучены его свойства. Разработанный вариант люциферазы NLuc обладает свойствами, близкими таковым интактной люциферазы NanoLuc и не теряет биолюминесцентную активность при химическом коньюгировании с различными биоспецифическими молекулами. Полученные на ее основе коньюгаты тестированы в молекулярном микроанализе ряда диагностически важных мишеней (кардиальных и онкомаркеров, а также корпускулярного антигена) и показана перспективность их использования для разработки тест-систем на их основе.